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          漩渦混勻器在生物學上的應用

          發布時間:2015-07-22   點擊次數:2002次
           在分子生物學中,我們經常要做細胞質粒DNA的提取和檢測的試驗,以便可以獲得DNA樣本,或者用于電泳檢測分析,了解樣品中是否含有質粒DNA,并判斷分子量的大小等等,因此,質粒DNA的提取是基因工程實驗中zui常用的手段之一。
            下面小編先為大家什么是質粒,質粒是一種染色體外的穩定遺傳銀子,大小從1kb到200kb不等,大多數來自細菌的質粒是雙鏈、共價閉合環狀的分子,并以超螺旋形式存在于宿主的細胞質中。它是細菌內的共生型遺傳因子,主要發現于細菌、放線菌和真菌細胞中,質粒具有自主復制和轉錄能力,能在子代細胞中保持恒定的拷貝數,并表達所攜帶的遺傳信息。
            質粒的分離是利用質粒DNA和染色體DNA在變性與復性中的差異來達到的目的。當菌體在NaOH和SDS溶液中裂解時,蛋白質與DNA發生變性,由于染色體DNA與質粒DNA拓撲構型不同,染色體DNA雙螺旋結構解開,而共價閉合質粒DNA的氫鍵雖被斷裂,但兩條互補鏈彼此相互盤繞仍會緊密地結合在儀器。當加入中和液后,溶液pH恢復至中性,在高鹽濃度的情況下,染色體DNA之間交聯形成不溶性網狀結構并與蛋白質SDS復合物等形成沉淀;不同的是質粒DNA復性迅速而準確,保持可溶狀態而留在上清中。這樣,通過離心可沉淀大部分細胞碎片、染色體DNA、RNA及蛋白質。除去沉淀后上清中的質??捎梅勇确鲁樘徇M一步純化質粒DNA。
            提取質粒DNAzui常見的方法是堿裂解法,具體步驟如下:首先講含有質粒的細菌接種到培養基,經過大約12小時的恒溫搖陪后棄去上清液,加入中和液后用漩渦混勻器將溶液充分混勻,然后加入堿液進行沉淀,這就是變性與復性,zui后的操作就是實驗室常用的沉淀的分離、純化。分離、純化DNA首先取上清液,加入分離液后采用漩渦混勻器混勻溶液,離心取上清液,加入無水乙醇后混勻,離心后棄上清液,干燥DNA即可。
            在這個實驗中,我們需要用到漩渦混勻器進行溶液混勻,本公司生產的漩渦混勻器可滿足每一個實驗室的需要和安全標準,該漩渦混勻器一旦檢測到試管即自動開始震動混勻,不需要施加任何外力,震動速度可調,時間可設,漩渦混勻器穩定性高,非常適合細胞質粒提取實驗。
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